蛋白層析柱使用減壓洗脫,避免了加壓洗脫時(shí)玻璃柱爆炸的危險(xiǎn)。另外,柱子是用預(yù)定量的溶劑洗脫,把溶劑流干直至再加洗脫劑。這些特性,使得干法快速柱層析技術(shù)特別適合梯度洗脫。事實(shí)上,這也是開發(fā)此類層析柱的常選方式。顧名思義,梯度洗脫使用的使極性逐漸增加的溶劑洗脫。
需要的設(shè)備很簡(jiǎn)單,就是把減壓抽濾所用的圓柱形多孔漏斗,通過一個(gè)錐形插口轉(zhuǎn)換頭連接到一個(gè)圓底燒瓶上,另外側(cè)邊的一個(gè)插口連接到水泵。要純化的樣品量決定了使用的漏斗的大小和洗脫液的接收體積。
蛋白層析柱干法裝柱是在一個(gè)層析柱中直接加入硅膠,填充到你需要的高度,然后向其中加入石油醚,讓溶劑*浸潤硅膠,直至下端流出。在確保不會(huì)干的前提下,上面可以加壓,讓硅膠填充更緊密。
這樣反復(fù)操作幾次,完成裝柱。濕法裝柱是先將需要的硅膠加入到一個(gè)燒杯中,然后加入石油醚,攪拌除去硅膠中的氣泡,然后將硅膠的懸濁液加入到層析柱中,加壓讓多余溶劑從下端流出,完成裝柱。
干法裝柱速度比較快,但不太容易裝緊密,適合快速分離那些分離度較高或者只有一個(gè)點(diǎn)的樣品。濕法裝柱速度慢,但是柱子比較緊密,適合分離較難分的樣品。而且濕法裝柱可以預(yù)先在拌硅膠的時(shí)候加入三乙胺之類的,中和硅膠的微量酸性,對(duì)于分離那些硅膠中容易分解變雜的化合物很有效。