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蛋白層析柱的長(zhǎng)短有什么區(qū)別嗎?

更新時(shí)間:2022-04-19瀏覽:913次

  蛋白層析柱的柱效測(cè)定是在純化實(shí)驗(yàn)中非常重要的步驟,也是我們得到準(zhǔn)確結(jié)果的保證。如果您是自己裝柱,建議您在使用前先做柱效測(cè)定來確定柱子的效果。另外,當(dāng)層析柱使用過一定次數(shù),或者發(fā)生實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常,柱子進(jìn)入氣泡,超壓等問題,我們也可以對(duì)柱子進(jìn)行柱效測(cè)定來判斷柱效是否正常。
 
  即使用少量的樣品流經(jīng)裝填好的層析柱中,通過儀器上的檢測(cè)器檢測(cè)實(shí)驗(yàn)過程,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)洗脫峰進(jìn)行分析。凝膠層析用來分離大小不同的蛋白,分子量小的通過凝膠顆粒中的孔隙路徑相對(duì)較長(zhǎng),分子量大的通過顆粒間隙路徑相對(duì)短些。同樣的時(shí)間,路徑短的,流的快的就先出,從而達(dá)到分離的目的。
 
  簡(jiǎn)單的比喻,兩人賽跑,一步之內(nèi)很難分勝負(fù),但是五十米,或者一百米就可以分出先后,所以柱子長(zhǎng)短關(guān)乎分離效果。其它層析如離子交換層析(親和層析)是靠跟配基結(jié)合能力強(qiáng)弱(特異性結(jié)合),來達(dá)到純化作用,裝柱的長(zhǎng)短關(guān)系著柱載量,所以柱的長(zhǎng)短由你的你的樣品量來決定。
 
  為了得到純度高、特異性好的抗大豆球蛋白多克隆抗體,用溴化氫活化的瓊脂糖4B純化經(jīng)硫酸銨分級(jí)沉淀后的抗體,此免疫親和層析過程節(jié)省時(shí)間且操作簡(jiǎn)單。經(jīng)凝膠過濾層析的大豆球蛋白,溶脹后的填料與大豆球蛋白配基以共價(jià)鍵的形式連接,利用抗原抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn),雜蛋白隨流動(dòng)相流出,再利用洗脫液將抗大豆球蛋白的目標(biāo)抗體特異性地洗脫下來,用紫外檢測(cè)儀檢測(cè)非特異性洗脫峰和特異性洗脫峰。
 
  通過鑒定,多抗血清中的其它蛋白組分被非特異性洗脫掉,經(jīng)濃度測(cè)定,特異性洗脫的蛋白質(zhì)量濃度為0.3mg/mL,間接ELISA顯示,純化后血清稀釋128倍后顯示為陽性。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定抗體特異性結(jié)果顯示抗體特異性得到提高??贵w被成功純化,為加工破壞大豆球蛋白致敏性亞分子結(jié)構(gòu)定位奠定基礎(chǔ),從而促進(jìn)低致敏性食品的研發(fā)。

 

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